Анализ эффективности работы системы сайт-специфической рекомбинации Cre/loxP на протяжении нескольких поколений трансформантов Arabidopsis thaliana
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2015, Vol 13, Issue 1
Abstract
Цель. Проанализировать эффективность работы сайт-специфической рекомбиназной системы Cre/loxP на протяжении нескольких поколений трансформантов Arabidopsis thaliana. Методы. Исследовали прирост трансформантов Arabidopsis thaliana свободных от селективных маркерных генов на протяжении нескольких поколений. Генетическая трансформация растений осуществлялась согласно новому подходу в использовании сайт-специфической рекомбиназной системы Cre/loxP под контролем 35S промотора. С этой целью были разработаны два варианта ДНК-конструкции, которые имели маркерный ген gus и ген рекомбиназы cre и были ограничены сайтами эксцизии loxP. Ген устойчивости к гигромицину hptII в обеих конструкциях выносился за границы сайтов loxP и в случае события эксцизии оставался в геноме растений. Селекцию трансформантов проводили на среде Мурасиге и Скуга с добавлением гигромицина (100 мг/л). Событие рекомбиназной эксцизии маркерных генов в геноме устанавливали с помощью гистохимического анализа и молекулярно-генетического анализа на протяжении трех поколений трансформантов. Результаты. Установлено, что количество трансформантов, которые не несут маркерных генов, увеличивается с каждым последующим поколением независимо от варианта трансформирующей конструкции. Во время проведения молекулярно-генетического анализа было установлено уменьшение количества интегрированной Т-ДНК на геном до минимума, что указывает на способность сайт-специфической рекомбиназной системы Cre/loxP контролировать количество событий интеграции в геноме растений. Выводы. Предложенный подход является достаточно простым в использовании и есть хорошей возможностью получения трансформированных растений, свободных от маркерных последовательностей в геноме.Ключевые слова: селективные маркерные гены, удаление маркерных последовательностей, сайт-специфическая рекомбиназа.
Authors and Affiliations
A. S. Sekan
Keywords
Related Articles
- EP ID EP613849
- DOI -
- Views 81
- Downloads 0
Післяслово до Х з’їзду Українського товариства генетиків і селекціонерів ім. М. І. Вавилова
Determination of the reference values of amino acids and acylcarnitines level in the newborn dry blood spots in Ukraine
Aim. Implementation of neonatal screening of the group of severe inherited disorders of amino acids, fatty and organic acids metabolism in Ukraine involves determination of the biological variation of amino acids and acy...
Поліморфізм у короткому плечі 1R хромосоми жита в лініях пшениці, що мають 1RS.1BL транслокацію та 1R(1В) заміщення з різних джерел
Мета. Коротке плече хромосоми жита (Secale cereale L.) 1R широко застосовується у селекції м’якої пшениці (Triticum aestivum L.), зокрема 1RS.1BL транслокація, для інтрогресії генів стійкості до листової (Lr26), стеблово...
Аналіз експресії ізоформ ITSN2 та TKS5 в пухлинах грудної залози людини
Мета. Незважаючи на великий прогрес у лікуванні, 15 % випадків раку молочної залози залишаються летальними. Попри багаторічні дослідження та великий досвід у лікуванні цього виду раку, однією з основних проблем в діагнос...
Організація та мінливість міжгенного спейсера 5S рДНК Lathyrus venetus
Мета. У популяціях Lathyrus venetus (Mill.) Wohlf. – реліктового виду, включеного до Червоної книги України з статусом «вразливий» – більшість рослин є гібридними формами зі спорідненим видом L. vernus (L.) Bernh. Тому в...