БІОТЕХНОЛОГІЯ ОТРИМАННЯ РЕКОМБІНАНТНОГО БІЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКУ (HSP-60) CHLAMYDIA TRACHOMATIS ТА ОЦІНКА ПЕРСПЕКТИВ ЙОГО ВИКОРИСТАННЯ У СЕРОЛОГІЧНІЙ ДІАГНОСТИЦІ
Journal Title: Naukovyi visnyk Chernivetskoho universytetu. Biolohiia (Biolohichni systemy) - Year 2014, Vol 6, Issue 2
Abstract
Виявлення гуморальної імунної відповіді на білок теплового шоку масою 60 кДа Chlamydia trachomatis (HSP- 60) має велике діагностичне значення, адже свідчить про ймовірний аутоімунний процес та ризик патології репродуктивної системи у жінок. Для розробки високоінформативного імуноферментного набору для виявлення анти-HSP-60 антитіл необхідно мати у розпорядженні відповідні біологічні компоненти, передусім очищений білок HSP-60. Найбільш сучасним є отримання білків-антигенів за допомогою методів генної інженерії та молекулярної біотехнології, що забезпечує не тільки стандартизацію отримуваного білка, але й дає можливість розробляти прогресивні технології виділення та очищення останнього. Проведено науково- методичну розробку біотехнології отримання рекомбінантного HSP-60 (rHSP-60) із накопиченням останнього у цитоплазмі клітин E. coli у розчинному вигляді: встановлені оптимальні параметри культивування продуценту (поживне середовище, температура, концентрація індуктора експресії та тривалість біосинтезу) забезпечують переважне (79%) накопичення цільового білка у розчинній формі. Технологія очистки rHSP-60 базується на використанні афінної хроматографії на глутатіон-сефарозі та ферментативного гідролізу GST- вмісного білку із використанням фактора згортання крові Ха, а також гель-фільтрації на Sephadex G-75 для доочищення. Для оцінки перспектив використання отриманого rHSP-60 нами були проведені порівняльні дослідження активності отриманого HSP-60 Ch. trachomatis як частини імуносорбенту у ІФА для виявлення відповідних специфічних антитіл класу IgG у сироватках крові людини. У якості антигенів для іммобілізації у лунках планшету використовували: власно отримані rHSP-60 та його білковий кон’югат rHSP-60-GST, комерційний аналог та GST. Додатково проводили оцінку імунологічної активності фракції мінорних білків, що містилися у елюаті після афінної хроматографії на глутатіон-сефарозі. Результати експериментів для групи позитивних сироваток оцінювали за індексом позитивності – співвідношенням середнього арифметичного значення оптичної густини у ІФА для позитивних та негативних (cut off) сироваток. Для отриманого rHSP-60 було отримано індекс позитивності на 30% вищій у порівняння із аналогічним комерційним протеїном. Порівняння імунологічної активності отриманого rHSP-60 та його кон’югату із GST засвідчили, що індекси позитивності при використанні двох даних білків у складі імуносорбенту були зіставними – 2,2 та 2,4, відповідно. Було доведено, що отримані нами препарати rHSP-60, а також його GST-кон’югату є високоактивними при їх використанні у складі імуносорбенту у імуноферментному аналізі для виявлення специфічних IgG-антитіл.
Authors and Affiliations
O. YU. GALKIN, O. B. BESARAB, A. S. GRYSHYNA, O. M. DUGAN, YU. M. GURZHENKO
Keywords
Related Articles
- EP ID EP246406
- DOI -
- Views 98
- Downloads 0
Monitoring of honey bee colony losses in Northern Bukovyna over the 2014-2015 winter
Increasing of plowing and widespread use of pesticides has led to a drastic reduction of diversity of insect-pollinators, including honey bees. In recent years, there can be observed a global extinction of bees (“colony...
Possible protective mechanisms of alpha-ketoglutarate on fruit fly drosophila melanogaster canton s under exposure to different stressors
Alpha-ketoglutaric acid is an important intermediate in Krebs cycle and in metabolism of amino acids. In recent years, the role of alpha-ketoglutaric acid as a powerful natural detoxifying agent was demonstrated. This wo...
АКТИВАЦІЙНА ДІЯ СОРБОВАНОГО ПЛАЗМІНУ. МОДЕЛЮВАННЯ IN VITRO
Одним з основних факторів розвитку запальних та онкологічних процесів є надмірна активаційна дія плазміну - ключового ферменту фібринолітичної ланки системі крові. Така значна активація обумовлена зв’язуванням пла-зміног...
Особливості адаптації рідкісного виду Schoenus ferrugineus L. до трансформованих умов довкілля
Визначено чинники антропогенної трансформації угруповань S. ferrugineus. Досліджені угруповання за флористичною класифікацією віднесено до одного класу осоково-мохової рослинності низинних, перехідних боліт і болотистих...
Вплив біологічно активних речовин сольового екстракту медичної п'явки на фагоцитарну активність нейтрофілів і цитоморфометричні зміни лімфоцитів крові людини у культурі
Досліджена культура клітин крові десяти донорів, чоловічої статі, зрілого віку, в якій, іn vitro вивчено імунологічну реактивність нейтрофілів і лімфоцитів на пекарські дріжджі на фоні різної концентрації біологічно акти...