БІОТЕХНОЛОГІЯ ОТРИМАННЯ РЕКОМБІНАНТНОГО БІЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКУ (HSP-60) CHLAMYDIA TRACHOMATIS ТА ОЦІНКА ПЕРСПЕКТИВ ЙОГО ВИКОРИСТАННЯ У СЕРОЛОГІЧНІЙ ДІАГНОСТИЦІ
Journal Title: Naukovyi visnyk Chernivetskoho universytetu. Biolohiia (Biolohichni systemy) - Year 2014, Vol 6, Issue 2
Abstract
Виявлення гуморальної імунної відповіді на білок теплового шоку масою 60 кДа Chlamydia trachomatis (HSP- 60) має велике діагностичне значення, адже свідчить про ймовірний аутоімунний процес та ризик патології репродуктивної системи у жінок. Для розробки високоінформативного імуноферментного набору для виявлення анти-HSP-60 антитіл необхідно мати у розпорядженні відповідні біологічні компоненти, передусім очищений білок HSP-60. Найбільш сучасним є отримання білків-антигенів за допомогою методів генної інженерії та молекулярної біотехнології, що забезпечує не тільки стандартизацію отримуваного білка, але й дає можливість розробляти прогресивні технології виділення та очищення останнього. Проведено науково- методичну розробку біотехнології отримання рекомбінантного HSP-60 (rHSP-60) із накопиченням останнього у цитоплазмі клітин E. coli у розчинному вигляді: встановлені оптимальні параметри культивування продуценту (поживне середовище, температура, концентрація індуктора експресії та тривалість біосинтезу) забезпечують переважне (79%) накопичення цільового білка у розчинній формі. Технологія очистки rHSP-60 базується на використанні афінної хроматографії на глутатіон-сефарозі та ферментативного гідролізу GST- вмісного білку із використанням фактора згортання крові Ха, а також гель-фільтрації на Sephadex G-75 для доочищення. Для оцінки перспектив використання отриманого rHSP-60 нами були проведені порівняльні дослідження активності отриманого HSP-60 Ch. trachomatis як частини імуносорбенту у ІФА для виявлення відповідних специфічних антитіл класу IgG у сироватках крові людини. У якості антигенів для іммобілізації у лунках планшету використовували: власно отримані rHSP-60 та його білковий кон’югат rHSP-60-GST, комерційний аналог та GST. Додатково проводили оцінку імунологічної активності фракції мінорних білків, що містилися у елюаті після афінної хроматографії на глутатіон-сефарозі. Результати експериментів для групи позитивних сироваток оцінювали за індексом позитивності – співвідношенням середнього арифметичного значення оптичної густини у ІФА для позитивних та негативних (cut off) сироваток. Для отриманого rHSP-60 було отримано індекс позитивності на 30% вищій у порівняння із аналогічним комерційним протеїном. Порівняння імунологічної активності отриманого rHSP-60 та його кон’югату із GST засвідчили, що індекси позитивності при використанні двох даних білків у складі імуносорбенту були зіставними – 2,2 та 2,4, відповідно. Було доведено, що отримані нами препарати rHSP-60, а також його GST-кон’югату є високоактивними при їх використанні у складі імуносорбенту у імуноферментному аналізі для виявлення специфічних IgG-антитіл.
Authors and Affiliations
O. YU. GALKIN, O. B. BESARAB, A. S. GRYSHYNA, O. M. DUGAN, YU. M. GURZHENKO
Keywords
Related Articles
- EP ID EP246406
- DOI -
- Views 107
- Downloads 0
Use of plants test systems for assess the toxicity of soil in Kamyanets-Podilsky
The evaluation of the toxicity of soil of Kamyanets-Podilsky. To study the soil chosen six points on streets with different amounts of traffic: point 1 – Shevchenko Street (control area) (residential street local), point...
Оптимізація еколого-безпечного та ефективного використання орних земель чернівецької області
Наведено визначення суті та значення районування земельних ресурсів для організації раціонального та еколого-безпечного землекористування. Представлено розміщення території Чернівецької області у загальнодержавній систем...
ДЕФІЦИТ ГЛЮКОЗИ ТА ГЛУТАМІНУ ЗМІНЮЄ ЕКСПРЕСІЮ ГЕНІВ MAP3K5, MAP4K3, CIB1, RIPK1, AND RIPK2 У КЛІТИНАХ ГЛІОМИ ЛІНІЇ U87 З ВИКЛЮЧЕНОЮ ФУНКЦІЄЮ СИГНАЛЬНОГО ЕНЗИМУ ERN1
Протеїнкінази відіграють важливу роль у рості злоякісних пухлин як ключові регулятори різноманітних метаболічних процесів. Ми вивчали ефект дефіциту глюкози та глутаміну на рівень експресії мРНК протеїнкінази кінази кіна...
ОСОБЛИВОСТІ ЗМІНИ ДЕЯКИХ БІОХІМІЧНИХ ПОКАЗНИКІВ У РІЗНИХ ЕКОЛОГІЧНИХ ГРУП РИБ ЗА ДІЇ АНТРОПОГЕННОГО НАВАНТАЖЕННЯ
Розглянуто вплив екологічних умов на вміст гормонів тироксину, трийодтироніну, активності ЛДГ та вмісту глюкози у плазмі крові верховодки, плітки, краснопірки, йоржа та окуня. Вміст трийодтироніну та тироксину визначали...
HABITATS OF THE ANTHROPOGENIC TYPE TERRITORY NATIONAL NATURE PARK «OLESHKOVSKI SANDS»
A classification of habitats on the anthropogenic type territory of National Nature Park «Oleshkovski Sands» was given based on our own research and analysis of published data by other researchers. This territory is situ...