БІОТЕХНОЛОГІЯ ОТРИМАННЯ РЕКОМБІНАНТНОГО БІЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКУ (HSP-60) CHLAMYDIA TRACHOMATIS ТА ОЦІНКА ПЕРСПЕКТИВ ЙОГО ВИКОРИСТАННЯ У СЕРОЛОГІЧНІЙ ДІАГНОСТИЦІ
Journal Title: Naukovyi visnyk Chernivetskoho universytetu. Biolohiia (Biolohichni systemy) - Year 2014, Vol 6, Issue 2
Abstract
Виявлення гуморальної імунної відповіді на білок теплового шоку масою 60 кДа Chlamydia trachomatis (HSP- 60) має велике діагностичне значення, адже свідчить про ймовірний аутоімунний процес та ризик патології репродуктивної системи у жінок. Для розробки високоінформативного імуноферментного набору для виявлення анти-HSP-60 антитіл необхідно мати у розпорядженні відповідні біологічні компоненти, передусім очищений білок HSP-60. Найбільш сучасним є отримання білків-антигенів за допомогою методів генної інженерії та молекулярної біотехнології, що забезпечує не тільки стандартизацію отримуваного білка, але й дає можливість розробляти прогресивні технології виділення та очищення останнього. Проведено науково- методичну розробку біотехнології отримання рекомбінантного HSP-60 (rHSP-60) із накопиченням останнього у цитоплазмі клітин E. coli у розчинному вигляді: встановлені оптимальні параметри культивування продуценту (поживне середовище, температура, концентрація індуктора експресії та тривалість біосинтезу) забезпечують переважне (79%) накопичення цільового білка у розчинній формі. Технологія очистки rHSP-60 базується на використанні афінної хроматографії на глутатіон-сефарозі та ферментативного гідролізу GST- вмісного білку із використанням фактора згортання крові Ха, а також гель-фільтрації на Sephadex G-75 для доочищення. Для оцінки перспектив використання отриманого rHSP-60 нами були проведені порівняльні дослідження активності отриманого HSP-60 Ch. trachomatis як частини імуносорбенту у ІФА для виявлення відповідних специфічних антитіл класу IgG у сироватках крові людини. У якості антигенів для іммобілізації у лунках планшету використовували: власно отримані rHSP-60 та його білковий кон’югат rHSP-60-GST, комерційний аналог та GST. Додатково проводили оцінку імунологічної активності фракції мінорних білків, що містилися у елюаті після афінної хроматографії на глутатіон-сефарозі. Результати експериментів для групи позитивних сироваток оцінювали за індексом позитивності – співвідношенням середнього арифметичного значення оптичної густини у ІФА для позитивних та негативних (cut off) сироваток. Для отриманого rHSP-60 було отримано індекс позитивності на 30% вищій у порівняння із аналогічним комерційним протеїном. Порівняння імунологічної активності отриманого rHSP-60 та його кон’югату із GST засвідчили, що індекси позитивності при використанні двох даних білків у складі імуносорбенту були зіставними – 2,2 та 2,4, відповідно. Було доведено, що отримані нами препарати rHSP-60, а також його GST-кон’югату є високоактивними при їх використанні у складі імуносорбенту у імуноферментному аналізі для виявлення специфічних IgG-антитіл.
Authors and Affiliations
O. YU. GALKIN, O. B. BESARAB, A. S. GRYSHYNA, O. M. DUGAN, YU. M. GURZHENKO
Keywords
Related Articles
- EP ID EP246406
- DOI -
- Views 78
- Downloads 0
MORPHOLOGICAL DIVERSITY OF LEAVES HAIRS IN TILIA L. (TILIACEAE) FROM UKRAINIAN FLORA
The trichomes on the leaf surface of fertile shoots of 15 Tilia L. species (21 infraspecific taxa from Anastraea Engl. and Astrophilyra Engl. sections, native or introduced in Ukrainian flora) have been described. Coveri...
Demutation processes of vegetation cover of the technogenic ecotopes within the Drohobych-Boryslav urbo-industrial complex
The Drohobych Boryslav urban-industrial area formed in the Lviv region as a result of activity of of mining, chemical and petrochemical industries. Man-made types ecotopes, formed during the production of ozokerit, potas...
Effect of local strains of nitrogen fixing nodule bacteria on some biochemical parameters of pea plants
Leguminous plants demonstrates cooperation between the processes of photosynthesis and nitrogen fixation. The concentration of pigments depends on the nitrogen supply to plants. Photosynthetic products which are formed i...
FEEDING OF COMMON PRUSSIAN CARP СARASSIUS GIBELIO IN THE DANUBE LAKES YALPUG AND KUGURLUY
The Danube Lakes form the most lake complex in Ukraine. The Yalpug Lake is the largest lake within the complex. Its area is about 149 km2, volume – about 387 million m3. Yalpug connects Kugurluj Lake in the south with a...
ЕФЕКТИВНІСТЬ ВИРОЩУВАННЯ ANABAENA HASSALII (KUTZ.) WITTR. ЗА РІЗНИХ УМОВ КУЛЬТИВУВАННЯ
Робота присвячена оцінці ефективності культивування альгологічно чистої культури Аnabaena hassalii (Kutz.) Wittr. на різних середовищах. Продуктивність культури аналізували за накопиченням білку та фотосинтезуючих пігмен...