Клонування послідовності гомологічного crt-кластера в Streptomyces globisporus 1912-бп
Journal Title: Фактори експериментальної еволюції організмів - Year 2018, Vol 22, Issue
Abstract
Мета. Встановити вплив додаткового гомологічного crt-кластера на каротиногенез у клітинах реципієнтного стрептоміцету. Методи. З цією метою було проведено трансформацію гібридною плазмідою pWC 9,6. Плазмідою pWC 9,6, що містила фрагмент послідовності crt-кластера (9576 п. н.) Crt+-мутанту S. globisporus Crt4, трансформували клітини Crt--реципієнта S. globisporus 1912-бп. Для побудови гібридної плазміди фрагменти отриманих ПЛР-копій послідовності crt-кластера мутанта Crt4 клонували в складі човникового вектора pWHM4 (6,6 т. п. н.). Клонування провели за унікальними сайтами рестрикції ендонуклеаз XbaI та HindIII, що знаходяться в полілінкері вектора. Дані рестриктази не мають сайтів рестрикції на послідовності crt‑кластера. Результати. Сконструйовано гібридну плазміду pWC 9,6 (16,2 т. п. н.), яка містить послідовність crt-кластера Crt+-мутанту Crt4 (9576 п. н.). Ця плазміда успішно функціонує в клітинах обох реципієнтів (E. coli XL1 Blue і S. globisporus 1912‑бп) – надає їм стійкості до відповідних антибіотиків. Плазміда pWC 9,6 стабільно зберігає свій молекулярний розмір (16,2 т. п. н.). Однак безперечних доказів експресії crt-кластерів у стрептоміцетних трансформантів не виявлено. Висновки. Сконструйовано плазміду pWC 9,6, що трансформує та стабільно функціонує в клітинах обох реципієнтів (стрептоміцета і E. сoli). Ключові слова: crt-кластер, човниковий вектор, клонування, резистентність, ПЛР.
Authors and Affiliations
В. В. Лук'янчук, Л. В. Поліщук
Keywords
Related Articles
- EP ID EP618785
- DOI -
- Views 37
- Downloads 0
ALLELIC STATE OF THE CRE8 GENE CONFERRING RESISTANCE TO THE NEMATODE HETERODERA AVENAE WOLL. IN COMMON WHEAT CULTIVARS OF UKRAINIAN BREEDING
Aim. The work is devoted to discovering the presence of resistance to the cereal cyst nematode in the Ukrainian common wheat germplasm. Methods. The molecular-genetic marker wri15 co-segregating with the Cre8 gene that c...
Methodological problems of biotic diagnostics of antropogenic transformation of forest ecosystems at the levels of organization of life
Aim. The purpose of the study was to identify and systematize the methodological problems of the diagnosis of anthropogenic transformation of forests by the levels of organization of life. Methods. Theoretical methods of...
DNA markers of AHAS1 gene for screening and identification of sunflower genotypes of hybrid origin
Aim. A molecular genetic study of sunflower F1 and F2 hybrids on a microsatellite markers of mutant AHAS1 gene associated with herbicide resistance was performed. The aim of the work was to screen of F1 and F2 sunflower...
Значення інтродукованих представників роду Prunus L. для селекції декоративної вишні
Мета. Потреба пошуку джерел і донорів дефіцитних для селекції східної декоративної вишні (сакури) ознак, а також необхідність впорядкування колекції цієї перспективної для вітчизняного садівництва деревної декоративної к...
Визначення стійкості азотфіксувальних мікроорганізмів ґрунту Еквадору до токсичних металів (CrO42–, Ni2+, Cu2+)
Мета. Метою роботи було визначення стійкості азотфіксувальних мікроорганізмів, ізольованих із ризосфери бромелії (Еквадор), до дії токсичних металів. Методи. Мікроорганізми ізолювали на поживному середовищі Ешбі. Отриман...