MMP-9 directed shRNAs as relevant inhibitors of matrix metalloproteinase 9 activity and signaling
Journal Title: Advances in Hygiene and Experimental Medicine - Year 2013, Vol 67, Issue 0
Abstract
Introduction: The main function of matrix metalloproteinases is the degradation of extracellular matrix components, which is related to changes in the proliferation of cells, their differentiation, motility, and death. MMPs play an important role in physiological processes such as embryogenesis, angiogenesis and tissue remodeling. The increase of MMPs activity is also observed in pathological conditions including tumorigenesis where MMP-2 (gelatinase A) and MMP-9 (gelatinase B) show the ability to degrade the basement membrane of vessels and they are involved in metastasis. The aim of our study was to verify the changes of MMP-9 enzymatic activity and the mobility of cells after inhibition of MMP-9 gene expression.Material and Methods: The oligonucleotide shRNA insert had been designed to silence MMP-9 gene expression and was cloned into the pSUPER.neo expression vector. The construct was introduced into the HeLa (CCL-2) cervical cancer cells by lipotransfection. Simultaneously in control cells MMP-9 were inhibited by doxycycline. Changes in activity of MMP-9 were analyzed by gelatin zymography and wound-healing assay.Results/Conclusions: Gelatin zymography allowed us to confirm that activity of MMP-9 in cells transfected by shRNA-MMP-9 and treated by doxycycline were similar and significantly lower in comparison with control cells. Phenotypic tests of migration in vitro confirm statistically significant (P<0.05) changes in cell migration – control cells healed 3 to 5 times faster in comparison with transfected or doxycycline treated cells. Our studies show the significant role of MMP-9 in mobility and invasiveness of tumor cells, thus indicating a potential target point of interest for gene therapy.
Authors and Affiliations
Ewa Nowak, Anna Galilejczyk, Daniel Sypniewski, Ilona Bednarek
Keywords
Related Articles
- EP ID EP67000
- DOI -
- Views 146
- Downloads 0
Inhibitory deacetylaz histonów – mechanizmy działania na poziomie molekularnym i zastosowania kliniczne
Deacetylazy histonów odgrywają znaczącą rolę w epigenetycznej regulacji ekspresji genów związanej z patogenezą nowotworów. Inhibitory deacetylaz histonów (HDI) rozważane są jako leki przeciwnowotworowe nowej generacji, i...
The participation of outer membrane proteins in the bacterial sensitivity to nanosilver
The presented study is to analyze the participation of outer membrane proteins of Gram- negative bacteria in sensitivity to silver nanomaterials. The mechanism of interaction of silver with the bacterial cell is best des...
Bakterie probiotyczne w przewodzie pokarmowym człowieka jako czynnik stymulujący układ odpornościowy*
Mikroflora bakteryjna układu pokarmowego człowieka uczestniczy w utrzymaniu ochrony organizmu przed antygenami i patogenami dostającymi się drogą pokarmową. Opisano wpływ mikroflory na układ odpornościowy związany z błon...
Rola naczyniowo-śródbłonkowego czynnika wzrostu w procesach zapalnych
Naczyniowo-śródbłonkowy czynnik wzrostu (vascular endothelial growth factor – VEGF) jest wytwarzany przez różne rodzaje komórek i odgrywa główną rolę w angiogenezie zarówno fizjologicznej, jak i patologicznej. VEGF jest...
γ–Liaza cystationinowa
γ-Cystationaza (CTH, EC: 4.4.1.1), enzym szeroko rozpowszechniony w świecie organizmów prokariotycznych i eukariotycznych, katalizuje powstawanie i przemiany związków zawierających siarkę sulfanową oraz odgrywa zasadnicz...