Оптимізація умов ренатурації злитого білка rhIl7-BAPmut із тілець включення Escherichia coli та його практичне застосування
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2019, Vol 17, Issue 1
Abstract
Мета. Метою нашої роботи була оптимізація методу ренатурації злитого білка rhIL7-BAPmut, створеного на основі рекомбінантного інтерлейкіну-7 людини (rhIL7) та бактерійної лужної фосфатази з підвищеними каталітичними властивостями (BAPmut), для його отримання у функціонально активній формі. Методи. Клітини E. coli BL21(DE3) трансформували плазмідним вектором pET24-IL7-BAPmut. Синтез білка індукували за протоколом аутоіндукції. Для ренатурації білка з бактерійних тілець включення in vitro застосовували іммобілізуючу металоафінну хроматографію (IMAX) та метод плавного розведення. Результати. Поєднання методів IMAX та плавного розведення в присутності аргініну, GSH/GSSG та іонів Mg2+ забезпечило отримання rhIL7-BAPmut в очищеній функціонально-активній формі. Біфункціональну активність rhIL7-BAPmut після ренатурації підтверджували імунохімічними методами шляхом зв’язування зі специфічними антитілами. Висновки. Було показано, що застосування rhIL7-BAPmut дозволяє значно скоротити час скринінгу імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів і не потребує використання специфічних первинних і вторинних антитіл. Злитий білок rhIL7-BAPmut може також використовуватись для якісного та кількісного аналізу рецепторів IL-7.
Authors and Affiliations
M. O. Usenko, O. V. Okunev, K. I. Bentsionova, O. B. Gorbatiuk, D. M. Irodov, M. V. Koval’chuk, V. A. Kordium
Keywords
Related Articles
- EP ID EP660050
- DOI 10.7124/visnyk.utgis.17.1.1199
- Views 80
- Downloads 0
Cognitive evolution or cognitive ontogenesis?
The article develops the idea that the human brain neuroevolution can become a universal object for the study of biological evolution. The main in neuroevolution person was the emergence of consciousness, i. e. ability t...
Academician of NAAS Boris V. Dzyubetsky (to the 80th anniversary)
Висвітлено основні віхи життєвого шляху і найголовніші наукові здобутки та досягнення у селекційній і науково-педагогічній роботі члена Українського товариства генетиків і селекціонерів ім. М. І. Вавилова Бориса Володими...
Lidia Stepanivna Bodnar (to the 60th anniversary)
Антифунгальна та рістрегулююча дія нових металоорганічних сполук
Мета даної роботи полягала у дослідженні нових хелатних комплексів платини, паладію та міді з різними органічними лігандами щодо антифунгальної дії по відношенню до фітопатогенних грибів роду Fusarium та визначенні харак...
Relevant studies on the issues of breeding, genetics and biotechnology in animals
XVII All-Ukrainian Scientific Conference of Young Scientists and Postgraduates with International Participation devoted to the 80th anniversary of the birth of Academician NAAS Valeriy Petrovich Burkat "Relevant studies...