Оптимізація умов ренатурації злитого білка rhIl7-BAPmut із тілець включення Escherichia coli та його практичне застосування
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2019, Vol 17, Issue 1
Abstract
Мета. Метою нашої роботи була оптимізація методу ренатурації злитого білка rhIL7-BAPmut, створеного на основі рекомбінантного інтерлейкіну-7 людини (rhIL7) та бактерійної лужної фосфатази з підвищеними каталітичними властивостями (BAPmut), для його отримання у функціонально активній формі. Методи. Клітини E. coli BL21(DE3) трансформували плазмідним вектором pET24-IL7-BAPmut. Синтез білка індукували за протоколом аутоіндукції. Для ренатурації білка з бактерійних тілець включення in vitro застосовували іммобілізуючу металоафінну хроматографію (IMAX) та метод плавного розведення. Результати. Поєднання методів IMAX та плавного розведення в присутності аргініну, GSH/GSSG та іонів Mg2+ забезпечило отримання rhIL7-BAPmut в очищеній функціонально-активній формі. Біфункціональну активність rhIL7-BAPmut після ренатурації підтверджували імунохімічними методами шляхом зв’язування зі специфічними антитілами. Висновки. Було показано, що застосування rhIL7-BAPmut дозволяє значно скоротити час скринінгу імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів і не потребує використання специфічних первинних і вторинних антитіл. Злитий білок rhIL7-BAPmut може також використовуватись для якісного та кількісного аналізу рецепторів IL-7.
Authors and Affiliations
M. O. Usenko, O. V. Okunev, K. I. Bentsionova, O. B. Gorbatiuk, D. M. Irodov, M. V. Koval’chuk, V. A. Kordium
Keywords
Related Articles
- EP ID EP660050
- DOI 10.7124/visnyk.utgis.17.1.1199
- Views 232
- Downloads 0
Эволюція дарвінізму. Синтетичесна теорія еволюції: 1926 – 1975 роки
Розглянуто процес об'єднання дарвінізму і генетики, який увійшов в історію біології як синтетична теорія еволюції.
Досягнення і перспективи сучасної генетики, селекції, біотехнології та еволюційної теорії (За матеріалами X Міжнародної наукової конференції «Фактори експериментальної еволюції організмів», 14–18 вересня 2015 р., м. Чернівці, Україна)
У статті подано інформацію про X Міжнародну наукову конференцію «Фактори експериментальної еволюції організмів», присвячену 150-річчю оприлюднення Грегором Менделем результатів «дослідів над рослинними гібридами» та 110-...
Особливості хромосомної мінливості в культурі тканин рослин Deschampsia antarctica Desv. з різним числом хромосом
Мета. З’ясувати особливості хромосомної мінливості в калюсних тканинах D. antarctica на перших пасажах вирощування in vitro. Методи. Отримання калюсів з кореневих експлантів асептичних рослин, вирощених з насіння, та под...
Professor S.V. Klymenko — an outstanding Ukrainian breeder of horticultural plants (to the 80th anniversary)
Висвітлено основні віхи життєвого шляху і найголовніші наукові здобутки та досягнення у селекційній і науково-педагогічній роботі члена Українського товариства генетиків і селекціонерів ім. М. І. Вавилова Світлани Валент...
Про розширене організаційне засідання Президії УТГіС щодо присвоєння імені М.І. Вавилова Національному природному парку «Черемоський»