Renaturacja in vitro białek zakumulowanych w ciałach inkluzyjnych
Journal Title: Advances in Hygiene and Experimental Medicine - Year 2012, Vol 66, Issue 0
Abstract
Rekombinowane białka i enzymy dzięki ich heterologicznej ekspresji w prokariotycznych systemach ekspresyjnych są powszechnie wykorzystywane w diagnostyce, medycynie i przemyśle. Wysoki poziom ekspresji obcych białek w komórkach bakteryjnych prowadzi jednak do tworzenia nieaktywnych i nierozpuszczalnych agregatów – ciał inkluzyjnych. Przywracanie zagregowanym białkom aktywności biologicznej jest procesem skomplikowanym i czasochłonnym. Każde reaktywowane białko wymaga eksperymentalnego ustalenia optymalnych warunków. Wybór procedury i czas jej trwania zależą od rodzaju rekombinowanego białka, jego właściwości oraz czystości ciał inkluzyjnych. Do reaktywacji białek zakumulowanym w ciałach inkluzyjnych niezbędne są 4 etapy: 1) izolacja ciał inkluzyjnych, 2) rozpuszczenie agregatów, 3) renaturacja i 4) oczyszczanie aktywnych katalitycznie cząsteczek. Wydajność procesu renaturacji zależy od wielu czynników: fizycznych, chemicznych i biologicznych. Parametry te determinują szybkość procesu, zapobiegają agregacji, wpływają na rozpuszczalność i ułatwiają fałdowanie łańcuchów peptydowych oraz stabilizację fałdowanych cząsteczek. Do najpowszechniej stosowanych metod renaturacji białek należą: rozcieńczenie, dializa oraz metody chromatograficzne.
Authors and Affiliations
Dorota Porowińska, Ewelina Marszałek, Paulina Wardęcka, Michał Komoszyński
Keywords
Related Articles
- EP ID EP66700
- DOI -
- Views 113
- Downloads 0
Identification of the genes expression profile associated with the ex vivo resistance to etoposide in childhood acute leukemias
Introduction: Drug resistance and the gene expression profiles might discriminate the therapy outcome, and indicate the subgroup of patients with poor prognosis. In this study we analyzed the gene expression profile in...
The role of endogenous cardiotonic steroids in pathogenesis of cardiovascular and renal complications of arterial hypertension
Endogenous cardiotonic steroids (CTS), also called digitalis-like factors, are a group of steroid hormones linking high salt intake and elevated blood pressure and in part responsible for target organ damage in arterial...
Treatment of Helicobacter pylori infections in the light of the increase of antibiotic resistance
The aim of this study was to present the risks associated with the occurrence of Helicobacter pylori (H. pylori) infection in humans and the problems related to eradication procedures with the use of antibiotic treatment...
Serotonin hypothesis and pulmonary artery hypertension
Tętnicze nadciśnienie płucne jest postępującą chorobą, prowadzącą do niewydolności prawej komory serca i przedwczesnej śmierci. Charakteryzuje się podwyższonym ciśnieniem w tętnicy płucnej, zwiększeniem oporu naczynioweg...
The role of genetic (PON1 polymorphism) and environmental factors, especially physical activity, in antioxidant function of paraoxonase*
Paraoxonase 1 ([i]PON1[/i]) is a member of a three-gene family ([i]PON1, PON2[/i], and [i]PON3[/i]). PON1 activity dominates in human plasma. It is secreted from hepatic cells and is found in the circulation bound to hig...