Automatyzacja izolacji DNA z materiałów biologicznych
Journal Title: Aparatura Badawcza i Dydaktycza - Year 2015, Vol 20, Issue 2
Abstract
Intensywny rozwój nauk biologicznych, zarówno w dziedzinie medycyny, kryminalistyki, jak i szeroko rozumianych badań związanych z biotechnologią, stworzył potrzebę doskonalenia technik analitycznych. Na szczególną uwagę zasługują metody biologii molekularnej bazujące na analizie kwasów nukleinowych, charakteryzujące się wysoką czułością i powtarzalnością. Pozwalają one na precyzyjną identyfikację śladów biologicznych, ocenę zmian w profilach ekspresji genów, a także pełną ewaluację bioróżnorodności nisz środowiskowych. Kluczowym elementem determinującym efektywność przeprowadzanych analiz jest etap pozyskiwania (izolacji) materiału genetycznego. Wyraźnie dostrzega się tendencje rozwoju technologii w kierunku zwiększenia przepustowości oraz dokładności izolacji DNA. Aktualnie możliwe jest pokonanie ograniczeń związanych z metodą manualnej izolacji poprzez zastosowanie gotowych zestawów oraz robotów automatycznych umożliwiających pracę z wieloma setkami prób jednocześnie. Celem badań było przeprowadzenie walidacji wybranych metod izolacji genomowego DNA. Wykorzystano trzy komercyjne zestawy. Dwa z nich, dedykowane platformie automatycznej BioRobot M48 Robotic Workstation (Qiagen), bazowały na zjawisku immobilizacji DNA na złożach z cząstkami paramagnetycznymi: QIAsymphony DNA Investigator Kit (Qiagen) oraz MagAttract® DNA Mini M48 (Qiagen). Trzeci zestaw, Sherlock AX (A&A Biotechnology), przeznaczony był do manualnej izolacji genomowego DNA i wykorzystywał mechanizm adsorbcji kwasów nukleinowych na membranach jonowymiennych połączonej ze strącaniem DNA izopropanolem. Ocenie poddano wykrywalność, powtarzalność, i odtwarzalność. Wyniki wskazują, że wszystkie analizowane metody pozwalają na izolację materiału genetycznego o wysokich standardach, który może być wykorzystany w dalszych procedurach badań molekularnych.
Authors and Affiliations
Justyna Staninska, Zuzanna Szczepaniak, Agnieszka Piotrowska-Cyplik, Paweł Cyplik, Jakub Czarny
Keywords
Related Articles
- EP ID EP199208
- DOI -
- Views 87
- Downloads 0
The effect of DNA isolation methods on genetic similarity of winter wheat (Triticum aestivum L.) lines using RA PD-PCR techniques
The aim of this study was to compare the effect of 4 DNA isolation methods on the results of analyses using molecular markers of Random Amplified Polymorphic DNA – Polymerase Chain Reaction (RAPDPCR) in winter wheat line...
Oczyszczanie wody popłucznej z instalacji basenowej w jednostkowym membranowym procesie ultrafiltracji oraz w układzie zintegrowanym napowietrzanie-ultrafiltracja
W pracy przedstawiono możliwość wykorzystania membranowego procesu ultrafiltracji do oczyszczania popłuczyn z instalacji basenowych. Badania obejmowały proces jednostkowy ultrafiltracji oraz zintegrowany układ napowietrz...
Stanowisko do badania amortyzatorów samochodowych wymontowanych z pojazdu
Celem pracy była budowa stanowiska do badania amortyzatorów wymontowanych z pojazdu, na którym można badać zmiany charakterystyk sił sprężająco-rozprężających w zależności od stopnia zużycia badanego amortyzatora. Następ...
Zastosowanie hydroponiki stagnującej w uprawie sałaty masłowej (Lactuca sativa L.) przy zróżnicowanym żywieniu borem
Doświadczenie wegetacyjne przeprowadzono w latach 2013-2014 w szklarni nieogrzewanej Stacji Doświadczalnej Katedr Wydziału Ogrodnictwa i Architektury Krajobrazu Uniwersytetu Przyrodniczego w Poznaniu. Celem przeprowadzon...
Chromatographic methods for determination of neopterin in urine
Neopterin is considered to be a non-specific marker for the activation of the human immune system. It is synthesized by monocytes/macrophages in the immune response caused by T cells. The physiological role of neopterin...