Standaryzacja metody oznaczenia ekspresji P-selektyny na płytkach krwi przy pomocy cytometru przepływowego oraz analiza porównawcza z metodą agregometrii impedancyjnej u chorych na ostrą białaczkę szpikową
Journal Title: Postępy Nauk Medycznych - Year 2015, Vol 28, Issue 6
Abstract
Wstęp. Uszkodzenie śródbłonka naczyniowego, stan zapalny lub zaburzenia zakrzepowe powodują aktywację płytek krwi. Aktywowane płytki krwi wykazują ekspresję P-selektyny na swojej powierzchni. Badanie ekspresji P-selektyny na płytkach krwi przy użyciu cytometru przepływowego pozwala na jednoczesną ocenę aktywacji płytek krwi (stanu pobudzenia) i ich reaktywności (czynności).Cel pracy. Opracowanie optymalnych warunków reakcji aktywacji płytek krwi agonistą ADP oraz czasu przechowywania próbek po wyznakowaniu i utrwaleniu. Analiza porównawcza funkcji płytek krwi badanych metodą cytometrii przepływowej i agregometrii impedancyjnej.Materiał i metody. Badaniem objęto 33 pacjentów z ostrą białaczką szpikową (AML) oraz 26 zdrowych dawców. Próbki krwi pobrane od zdrowych dawców inkubowano z 10 μM/l i 20 μM/l ADP przez 2, 5, 10 i 15 min. Płytki znakowano przeciwciałamiCD61-FITC, CD45-PerCP i CD62P-PE. Zbadano stabilność próbki po 2, 3, 4, 5 i 6 godzinach przechowywania. Oceniono czynność płytek krwi u pacjentów z AML metodą cytometryczną i agregometrii impedancyjnej oraz porównano otrzymane wyniki.Wyniki. Po zastosowaniu 20 μM/l ADP przez 2 i 5 minut uzyskano ekspresję P-selektyny: 67,7 ± 3,0% i 67,6 ± 2,3%. Wydłużenie czasu aktywacji powodowało obniżenie udziału komórek CD62P dodatnich: 60,5 ± 3,8% i 56,4 ± 4,1% (p < 0,05). Płytki krwi aktywowane 10 μM/l ADP wykazywały niższy odsetek CD62P (p < 0,05). Wraz ze wzrostem czasu inkubacji wzrastała liczba agregatów (p < 0,05). Oznaczenia ekspresji P-selektyny w 5 punktach czasowych były porównywalne V = 2,21% (p < 0,01). Ekspresja P-selektyny u pacjentów z AML wyniosła 42,6 ± 13,2% (grupa kontrolna 64,0 ± 7,4%) (p < 0,01).Stwierdzono korelację pomiędzy wynikami badań czynności płytek otrzymanymi dwiema metodami R = 0,66 (p < 0,01).Wnioski. Najbardziej efektywne warunki aktywacji uzyskano inkubując płytki z 20 μM/l ADP przez 2 minuty. Wykazano, że po utrwaleniu paraformaldehydem próbki zachowują stabilność do 6 godzin. Stwierdzono obniżenie czynności płytek krwi u pacjentów z AML w stosunku do grupy kontrolnej metodą cytometrii przepływowej oraz agregometrii impedancyjnej.
Authors and Affiliations
Joanna Bienias, Krystyna Jagoda, Mirosław Markiewicz, Agata Wieczorkiewicz-Kabut, Sławomira Kyrcz-Krzemień
Keywords
Related Articles
- EP ID EP77408
- DOI 10.5604/08606196.1157920
- Views 186
- Downloads 0
Czy testy IGRA mogą okazać się pomocne w diagnostyce gruźlicy płuc i postaci pozapłucnych?
Rozpoznanie gruźlicy płuc i gruźliczego zapalenia opłucnej standardowymi metodami diagnostyki mikrobiologicznej jest trudne i długotrwałe. Obecnie, duże nadzieje wiąże się z komórkami limfocytów T wydzielającymi interfer...
Vitamin D deficiency in obesity and its relationship to insulin resistance and plasma leptin levels – preliminary study
Introduction. Obesity is a risk factor for vitamin D deficiency and there is some evidence that vitamin D may be involved in the pathogenesis of insulin resistance.Aim. The aim of the study was to evaluate whether vitami...
Wczesne wyniki operacji laparoskopowych u chorych leczonych z powodu guzów jelita grubego
Cel pracy. Ocena wczesnych wyników leczenia chorych operowanych laparoskopowo z powodu guzów jelita grubego. Materiał. W okresie 2 lat leczono operacyjnie 208 chorych z powodu guzów łagodnych i złośliwych. Dane zbierano...
Ocena krwinek płytkowych po procesie kriokonserwacji
Wstęp. Koncentraty krwinek płytkowych stosuje się w leczeniu krwawień u pacjentów z małopłytkowością, w celu zapobiegania spontanicznym krwotokom oraz w czasie inwazyjnych zabiegów chirurgicznych. Metodą pozwalającą na d...
Intoxications by chemicals for plant protection
Plant protection products are substances or mixtures thereof, and living organisms designed to protect crops against harmful organisms, destruction of undesirable plants, regulate growth, development and other biological...