Soğuk şok ekspresyon sistemi kaynaklı intein tabanlı katyonik antimikrobiyal peptitin tuz tarafından uyarılan E. coli GJ1158’den maliyet etkin şekilde saflaştırılması
Journal Title: Journal of Microbiology and Infectious Diseases - Year 2014, Vol 4, Issue 1
Abstract
Amaç: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid (SK-AMP) önemi gittikçe artan ve konvansiyonel antibiyotiklere alternatif olması beklenen terapötik bir moleküldür. Bu çalışmada SK-AMP’yi intein tabanlı bir sistem ile enzimatik parçalanma olmaksızın saflaştırmak amaçlanmıştır. Yöntemler: İntein sekansı pTYB11 vektöründen PZR kullanılarak amplifiye edildi ve inteinin N-terminal ucu SK-AMP ile bağlandı. Oluşturulan bu yapı soğuk şok ekspresyon vektörü MCS bölgesine klonlandı. pCOLDI ve rekombinan peptid kitin afinite kodonundan 50 mM DDT ile ayrılarak enzimatik ayrıştırma olmaksızın toplandı. Daha sonra toplanan peptitin miktarı belirlendi ve saflaştırılan pepitd yapının antimikrobiyal aktivitesi difüzyon yöntemi ile belirlendi. Bulgular: Başlangıçta intein bağlı SK-AMP, IPTG indüklenebilir E. coli BL21(DE3) ve tuz indüklenebilir E. coli GJ1158’de bir füzyon protein olarak eksprese edildi. Tuz ile indüklenen E. coli GJ1158’de kitin bağlayan kodonun kullanıldığı tek basamaklı saflaştırma ile 208 mg/L konsantrasyonunda çözünebilir SK-AMP elde edildi. Saflaştırılmış SK-AMP’nin antibakteriyel etkisi hem gram pozitif hem de gram negatif bakterilere karşı gösterildi ve minimum inhibitör konsantrasyonu belirlendi. Sonuçlar: İlk kez çözünebilir SK-AMP tuz ile indüklenebilir E. coli GJ1158’den kitin bağlayan kodon kullanılarak tek basamakta enzimatik ayrışma olmaksızın elde edildi. Anahtar kelimeler: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid, intein sekansı, pCOLDI, kitin bağlayan kodon, E. coli BL21(DE3) ve E. coliGJ1158
Authors and Affiliations
K Seetha Ram, M Mary Kumari, S. Divya Sri, N Bhargava Ramudu, JB Peravali, KK Pulicherla
Keywords
Related Articles
- EP ID EP131411
- DOI 10.5799/ahinjs.02.2014.01.0117
- Views 128
- Downloads 0
Small colony variant of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from an osteomyelitis case
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus small colony variants may cause soft tissue infections. However, any case presenting with soft tissue abscess after a fracture surgery is not been reported yet. In this report...
Cryptococcal Cellulitis in a Diabetic with Nephropathy on Adalimumab Therapy for Rheumatoid Arthritis
Cutaneous infection with Cryptococcus neoformans is rare but can occur in the setting of rheumatoid arthritis due to immunosuppression. Risk factors include chronic kidney disease and use of tumor necrosis factor-alpha (...
Streptococcus suis Meningitis in a French Cooker: Case Report and Review
Streptococcus suis is an emerging zoonotic pathogen, increasingly reported worldwide and especially in Asia. S. suis remains rare in France but is responsible for outbreaks in Asia, causing meningitis, septicemia, endoca...
Kompartman sendromuna neden olan deri şarbonu olguları
Bacillus anthracis şarbon hastalığının etkenidir. Şarbon, üç klinik formu bulunan, zoonozdur. Klinik formlar deri, inhalasyon ve gastrointestinal şarbondur. Olguların % 95’ini deri şarbonudur. Hastalık genellikle kendi k...
Phenotypic Detection of Extended Spectrum β-Lactamase and AmpC producing Enterobacteriaceae Isolated in A General Hospital
Phenotypic Detection of Extended Spectrum β-Lactamase and AmpC producing Enterobacteriaceae Isolated in A General Hospital Cecile Okalla Ebongue1,2, Roane Nkodo Mengue2, Jean-Pierre Nda Mefo’o1,2, Elvis Temfack1, Emmanue...