Soğuk şok ekspresyon sistemi kaynaklı intein tabanlı katyonik antimikrobiyal peptitin tuz tarafından uyarılan E. coli GJ1158’den maliyet etkin şekilde saflaştırılması
Journal Title: Journal of Microbiology and Infectious Diseases - Year 2014, Vol 4, Issue 1
Abstract
Amaç: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid (SK-AMP) önemi gittikçe artan ve konvansiyonel antibiyotiklere alternatif olması beklenen terapötik bir moleküldür. Bu çalışmada SK-AMP’yi intein tabanlı bir sistem ile enzimatik parçalanma olmaksızın saflaştırmak amaçlanmıştır. Yöntemler: İntein sekansı pTYB11 vektöründen PZR kullanılarak amplifiye edildi ve inteinin N-terminal ucu SK-AMP ile bağlandı. Oluşturulan bu yapı soğuk şok ekspresyon vektörü MCS bölgesine klonlandı. pCOLDI ve rekombinan peptid kitin afinite kodonundan 50 mM DDT ile ayrılarak enzimatik ayrıştırma olmaksızın toplandı. Daha sonra toplanan peptitin miktarı belirlendi ve saflaştırılan pepitd yapının antimikrobiyal aktivitesi difüzyon yöntemi ile belirlendi. Bulgular: Başlangıçta intein bağlı SK-AMP, IPTG indüklenebilir E. coli BL21(DE3) ve tuz indüklenebilir E. coli GJ1158’de bir füzyon protein olarak eksprese edildi. Tuz ile indüklenen E. coli GJ1158’de kitin bağlayan kodonun kullanıldığı tek basamaklı saflaştırma ile 208 mg/L konsantrasyonunda çözünebilir SK-AMP elde edildi. Saflaştırılmış SK-AMP’nin antibakteriyel etkisi hem gram pozitif hem de gram negatif bakterilere karşı gösterildi ve minimum inhibitör konsantrasyonu belirlendi. Sonuçlar: İlk kez çözünebilir SK-AMP tuz ile indüklenebilir E. coli GJ1158’den kitin bağlayan kodon kullanılarak tek basamakta enzimatik ayrışma olmaksızın elde edildi. Anahtar kelimeler: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid, intein sekansı, pCOLDI, kitin bağlayan kodon, E. coli BL21(DE3) ve E. coliGJ1158
Authors and Affiliations
K Seetha Ram, M Mary Kumari, S. Divya Sri, N Bhargava Ramudu, JB Peravali, KK Pulicherla
Keywords
Related Articles
- EP ID EP131411
- DOI 10.5799/ahinjs.02.2014.01.0117
- Views 133
- Downloads 0
Daptomycin for the treatment of daptomycin nonsusceptible Enterococcus faecium bacteremia
The best therapeutic options for serious infections due to daptomycin nonsusceptible Enterococcus faecium (DNSE) remain unclear. We report the use of daptomycin for the treatment of DNSE bacteremia. To our knowledge, it...
Fusarium: A rare factor in diabetic foot infection
Diabetic foot infections are an important cause of morbidity. In humans, Fusarium causes external infections. A male obese patient at the age of 56 who had been getting treatment in various clinics due to ulceration and...
Prevalence of Staphylococci in Commercially Processed Food Products in Karachi-Pakistan
Objectives: This study was designed to determine the prevalence of Staphylococci, Staphylococcus aureus (S. aureus), and Methicillin Resistant S. aureus (MRSA) in commercially prepared food items that involve human handl...
Mycobacterium tuberculosis kompleksinin saptanmasında dokuz farklı nükleik asit amplifikasyon yönteminin tanısal değeri
Amaç: Bu çalışmada, yayma pozitif balgam örneklerinde ve yayma negatif balgam örneklerinde Mycobacterium tuberculosis kompleks (MTBK)’nin hızlı tanısında dokuz ticari Nükleik Asit Amplifikasyon Test sistemi (NAAT)’n...
A case: Acute myocardial infarction in a child due to spider bite
This report presents a case of a ten-years-old girl, who suffered myocardial ischemia following by “black widow” spider bite. A few minutes after the bite, her parents saw a small, black and shiny lesion in insect bite....