Soğuk şok ekspresyon sistemi kaynaklı intein tabanlı katyonik antimikrobiyal peptitin tuz tarafından uyarılan E. coli GJ1158’den maliyet etkin şekilde saflaştırılması
Journal Title: Journal of Microbiology and Infectious Diseases - Year 2014, Vol 4, Issue 1
Abstract
Amaç: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid (SK-AMP) önemi gittikçe artan ve konvansiyonel antibiyotiklere alternatif olması beklenen terapötik bir moleküldür. Bu çalışmada SK-AMP’yi intein tabanlı bir sistem ile enzimatik parçalanma olmaksızın saflaştırmak amaçlanmıştır. Yöntemler: İntein sekansı pTYB11 vektöründen PZR kullanılarak amplifiye edildi ve inteinin N-terminal ucu SK-AMP ile bağlandı. Oluşturulan bu yapı soğuk şok ekspresyon vektörü MCS bölgesine klonlandı. pCOLDI ve rekombinan peptid kitin afinite kodonundan 50 mM DDT ile ayrılarak enzimatik ayrıştırma olmaksızın toplandı. Daha sonra toplanan peptitin miktarı belirlendi ve saflaştırılan pepitd yapının antimikrobiyal aktivitesi difüzyon yöntemi ile belirlendi. Bulgular: Başlangıçta intein bağlı SK-AMP, IPTG indüklenebilir E. coli BL21(DE3) ve tuz indüklenebilir E. coli GJ1158’de bir füzyon protein olarak eksprese edildi. Tuz ile indüklenen E. coli GJ1158’de kitin bağlayan kodonun kullanıldığı tek basamaklı saflaştırma ile 208 mg/L konsantrasyonunda çözünebilir SK-AMP elde edildi. Saflaştırılmış SK-AMP’nin antibakteriyel etkisi hem gram pozitif hem de gram negatif bakterilere karşı gösterildi ve minimum inhibitör konsantrasyonu belirlendi. Sonuçlar: İlk kez çözünebilir SK-AMP tuz ile indüklenebilir E. coli GJ1158’den kitin bağlayan kodon kullanılarak tek basamakta enzimatik ayrışma olmaksızın elde edildi. Anahtar kelimeler: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid, intein sekansı, pCOLDI, kitin bağlayan kodon, E. coli BL21(DE3) ve E. coliGJ1158
Authors and Affiliations
K Seetha Ram, M Mary Kumari, S. Divya Sri, N Bhargava Ramudu, JB Peravali, KK Pulicherla
Keywords
Related Articles
- EP ID EP131411
- DOI 10.5799/ahinjs.02.2014.01.0117
- Views 114
- Downloads 0
Laktozu fermente eden Salmonella paratyphi A: Bir vaka sunumu
Salmonella genusunda 2500’den fazla antijenik tipleri bulunmaktadır. Salmonella typhi ve Salmonella paratyphi A, B ve C tifo etkenidirler. Karakteristik olarak bu dört tür de laktozu fermente etmezler. Burada, 12 günlük...
Tam dirençli gram negative bakterilerin doğuşu: Hindistan’dan ilk vaka serisi
Amaç: Karbapenem dirençli Gram negatif bakterilerin sıklığının artması halk sağlığı ve klinik yaklaşım açısından ciddi bir problemdir. Mevcut bütün antibiyotiklere dirençli (tam dirençli) bakteriler antibiyotik sonrası d...
Detection of Streptobacillus moniliformis in whole blood by real-time PCR and review of clinical cases 2004-2015 in New York State
Objectives: Early identification of Streptobacillus moniliformis infections that cause rat bite fever (RBF) can be challenging and treatment of these infections is important for the reduction of morbidity and mortality....
İnsan cilt enfeksiyonundan ilk defa izole ediln Pseudomonas argentinensis olgusu
Bu 2005 yılında Pseudomonas argentinensis’in tanımlanmasından sonra insan kaynaklı tekrarlayan cilt enfeksiyonundan izole edilen ilk P. argentinensis olgusu bildirimidir. Filistinli 63 yaşındaki erkek bir hastada güneşl...
Cascade of Care for HIV Positive Patients in a Rural Health Region in the North-Central Region of Ivory Coast: A Follow-up Study
Objective: To describe the cascade of care for HIV positive patients in the health region of Worodougou-Béré, North-Central Region of Ivory Coast. Methods: Cross-sectional study which included patients diagnosed HIV posi...