Zastosowanie analizy ‘multiplex PCR’ do identyfikacji męsko-sterylnej cytoplazmy typu ogura oraz genu restorera Rfo w materiałach hodowlanych rzepaku
Journal Title: Rośliny Oleiste - Oilseed Crops - Year 2010, Vol 31, Issue 2
Abstract
Ze względu na opracowanie dla rzepaku systemów męskiej sterylności pozwalających na kontrolę zapylenia krzyżowego wzrasta zainteresowanie hodowców odmianami mieszańcowymi tej rośliny. W Krajowym Rejestrze COBORU wpisanych jest 111 odmian rzepaku, w tym 87 odmian ozimych, z których 35 stanowią odmiany mieszańcowe. Mieszańce zrestorowane F1 oraz linie restorerów nie różnią się fenotypowo od odmian podwójnie ulepszonych, dlatego w celu monitorowania obecności męsko-sterylnej cytoplazmy (CMS) typu ogura oraz genu restorera Rfo stosowano niezależnie dwa markery genetyczne, specyficzne dla CMS ogura (marker SCAR, około 500 par zasad) i genu Rfo (marker SCAR, 1 100 pz). W celu zwiększenia efektywności i obniżenia kosztów prowadzonych analiz zaadaptowano podejście w oparciu o metodę multiplex PCR, polegającą na jednoczesnej analizie obu markerów SCAR zamplifikowanych w jednej PCR. Dodatkowo, włączono kontrolę wewnętrzną polegającą na amplifikacji metodą PCR zachowawczego fragmentu cDNA aktyny (marker SCAR, 600 pz), stanowiącej białko powszechnie występujące w strukturach komórkowych. Dzięki temu wyeliminowano fałszywe wyniki negatywne, spowodowane degradacją analizowanego DNA, złą jakością odczynników lub błędem podczas wykonywania reakcji. Przy użyciu metody multiplex PCR przeanalizowano 208 prób DNA uzyskanych z mieszańców F1, linii restorerów oraz form hodowlanych rekombinantów. Równolegle prowadzono badania z zastosowaniem dwóch markerów w niezależnych reakcjach, co potwierdziło skuteczność metody. Znajdzie ona szerokie zastosowanie do rutynowych analiz w hodowli mieszańcowej i rekombinacyjnej.
Authors and Affiliations
Katarzyna Mikołajczyk, Agnieszka Dobrzycka, Jan Podkowiński, Wiesława Popławska, Stanisław Spasibionek, Iwona Bartkowiak-Broda
Keywords
Related Articles
- EP ID EP59605
- DOI -
- Views 82
- Downloads 0
Wykorzystanie krzyżowania oddalonego do poszerzania zmienności genetycznej w rodzaju Brassica sp.
Krzyżowanie roślin genetycznie oddalonych pozwala na wprowadzenie korzystnych cech z form dzikich do form uprawnych. Niezgodność genetyczna występująca między krzyżowanymi gatunkami często uniemożliwia efektywne krzyżowa...
Cleared-ovule method applied to the evaluation of the effectiveness of pollinations in wide crosses within Brassica genera
An attempt was made to adapt a cleared-ovule method developed by Ponitka and Ślusarkiewicz-Jarzinę (2004) for evaluation of crossing effectiveness in wide crosses within Brassica genera. The material used in this experim...
Zmienność nasion różnych typów odmian lnu zwyczajnego Linum usitatissimum L.
Wpływ przedsiewnej stymulacji nasion światłem czerwonym na zawartość składników pokarmowych w nasionach pokolenia potomnego rzepaku ozimego II. Zawartość i skład kwasów tłuszczowych
W nasionach rzepaku ozimego pokolenia potomnego pochodzących z doświadczenia polowego oznaczono zawartość i skład niektórych kwasów tłuszczowych (C16:0, C16:1, C18:0, C18:1, C18:2, C18:3, C20:0, C20:1, C18:2/C18:3). Czyn...
Ocena estrów metylowych kwasów tłuszczowych (FAME) uzyskanych z wybranych surowców
Omówiono tłuszcze zwierzęce: łój i smalec jako surowce do produkcji bioestrów w porównaniu do bioestrów z oleju rzepakowego. Przedstawiono wyniki oznaczania produktów pośrednich transestryfikacji mono- i diacylogliceroli...