Zastosowanie analizy ‘multiplex PCR’ do identyfikacji męsko-sterylnej cytoplazmy typu ogura oraz genu restorera Rfo w materiałach hodowlanych rzepaku
Journal Title: Rośliny Oleiste - Oilseed Crops - Year 2010, Vol 31, Issue 2
Abstract
Ze względu na opracowanie dla rzepaku systemów męskiej sterylności pozwalających na kontrolę zapylenia krzyżowego wzrasta zainteresowanie hodowców odmianami mieszańcowymi tej rośliny. W Krajowym Rejestrze COBORU wpisanych jest 111 odmian rzepaku, w tym 87 odmian ozimych, z których 35 stanowią odmiany mieszańcowe. Mieszańce zrestorowane F1 oraz linie restorerów nie różnią się fenotypowo od odmian podwójnie ulepszonych, dlatego w celu monitorowania obecności męsko-sterylnej cytoplazmy (CMS) typu ogura oraz genu restorera Rfo stosowano niezależnie dwa markery genetyczne, specyficzne dla CMS ogura (marker SCAR, około 500 par zasad) i genu Rfo (marker SCAR, 1 100 pz). W celu zwiększenia efektywności i obniżenia kosztów prowadzonych analiz zaadaptowano podejście w oparciu o metodę multiplex PCR, polegającą na jednoczesnej analizie obu markerów SCAR zamplifikowanych w jednej PCR. Dodatkowo, włączono kontrolę wewnętrzną polegającą na amplifikacji metodą PCR zachowawczego fragmentu cDNA aktyny (marker SCAR, 600 pz), stanowiącej białko powszechnie występujące w strukturach komórkowych. Dzięki temu wyeliminowano fałszywe wyniki negatywne, spowodowane degradacją analizowanego DNA, złą jakością odczynników lub błędem podczas wykonywania reakcji. Przy użyciu metody multiplex PCR przeanalizowano 208 prób DNA uzyskanych z mieszańców F1, linii restorerów oraz form hodowlanych rekombinantów. Równolegle prowadzono badania z zastosowaniem dwóch markerów w niezależnych reakcjach, co potwierdziło skuteczność metody. Znajdzie ona szerokie zastosowanie do rutynowych analiz w hodowli mieszańcowej i rekombinacyjnej.
Authors and Affiliations
Katarzyna Mikołajczyk, Agnieszka Dobrzycka, Jan Podkowiński, Wiesława Popławska, Stanisław Spasibionek, Iwona Bartkowiak-Broda
Keywords
Related Articles
- EP ID EP59605
- DOI -
- Views 104
- Downloads 0
Progress in research on phoma stem canker (Leptosphaeria spp.)
Leptosphaeria maculans (Desm.) Ces. et de Not. and Leptosphaeria biglobosa belong to the group of the most dangerous fungal pathogens causing the decrease of rapeseed yield (Shoemaker and Brun 2001). Research on these pa...
The effect of addition of different quantity of enzyme preparation on nutritive value of mixtures for broiler chickens
The aim of this research was to determine the effect of increasing quantities of enzyme preparation on nutritive value of diets for broiler chickens. The growth experiment was carried out on 75 broiler chickens divided i...
Preliminary investigation on optimum condition of to induce mutation for development new variability in opium poppy ([i]Papaver somniferum[/i] L.)
The aim of the studies was to identify optimum method for inducing mutagenesis to obtain new of alkaloid variation in poppy.The study material consisted of breeding lines derived from recombinants of various forms of hig...
The estimation of diets with rapeseed cakes from new cultivars for broiler chickens
The mixtures where part of soybean meal was replaced by rapeseed cakes from three rapeseed varieties were evaluated in these investigations. The experiment I was carried out on 120 one-day old broiler chickens Ross 308 a...
Ocena koloru nasion rzepaku przy użyciu spektrokolorymetru oraz spektrometru odbiciowego na bliską podczerwień (NIRS)
Jednym z podstawowych kierunków hodowli nowych odmian rzepaku jest otrzymanie rzepaku żółtonasiennego. Jego zaletą jest zredukowana zawartość polifenoli i włókna w nasionach. Żółtonasienny rzepak od dawna jest celem wie...